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2019-227
(一)原理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不相同。在实验中,电泳凝胶分为两层:上层胶为低浓度的大孔胶,称为浓缩胶或成层胶,配制此层胶的缓冲液是Tris-HCl,pH6.7;下层胶则是高浓度的小孔胶,称为分离胶或电泳胶,成胶的缓...
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2019-227
【原理】琼脂糖(agarose)是经过挑选,以质地较纯的琼脂(agar)作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电泳及凝胶过滤以的影响。琼脂糖是直链多糖,它由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列组成。琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大(98-99%),近似自由电泳,因为固体支持物的影响少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是...
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2019-225
凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。实验方法蛋白质的凝胶过滤分离实验材料蛋白质试剂、试剂盒凝胶过滤缓冲液仪器、耗材布氏漏斗凝胶过滤层析柱分光光度计实验步骤1.如果凝胶过滤的介质是干粉,则需在凝胶过滤缓冲液中*溶胀。2.在远离过往通道及直接光照的...
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2019-225
实验原理琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与相对分子量成反比。不同构型的DNA分子的迁移速度不同。如环形DNA分子样品,其中有三种构型的分子:超螺旋分子(c...
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2019-220
蠕动泵的原理简介:蠕动泵由于输出的流量非常稳定因此又叫恒流泵,由于蠕动泵是靠挤压软管而达到泵送流体的功能的因此又叫软管泵。蠕动泵的机械原理十分简单。它是由转轮挤压着泵管并转动从而推动管内的流体向前移动从而产生流体流动的,就象用两根手指夹挤一跟充满液体的软管一样,随着手指的移动,管内形成负压,液体随之流动。蠕动泵、恒流泵和软管泵的特点:1、洁清无污染:流体只通过和接触蠕动泵软管。2、精度高:恒流、重现精度高达0.5%,流量可**调节。3、低剪切力:是输送剪切敏感,侵蚀性强流体的...
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